从全血里纯化单个核细胞人、大鼠和小鼠

仪器：离心机（低速冷冻离心机，可使用24*15ml离心管，水平转子）；抽血注射器（大小与抽血体积相一致）
试剂：Optiprep；Tricine-缓冲盐溶液（TBS,仅小鼠血）0.85%（质量浓度）NaCl，10mmol/L Tricine-NaOH（ph = 7.4）。
 
方法：样品收集
 
1）        收集人外周血，用EDTA（1mmol/L）或柠檬酸盐（3.8%，质量浓度）抗凝（为了避免对结果的影响，避免使用肝素）。
2）        用CO2麻醉大鼠，收集血液（约10ml），把血液收集到含有1ml 3.8%（质量浓度）柠檬酸盐的10ml注射器里。
3）        用CO2麻醉小鼠，收集血液，把血液收集到含有0.1ml 3.8%（质量浓度）柠檬酸盐的2ml注射器里。
 
细胞的分级分离
 
1）        取1.25ml（用于人血）或1.26ml（用于大鼠血）Optiprep与10ml的血液轻轻混血（反复颠倒）。对于小鼠血液（0.5~1.0ml），5.0ml TBS与1.5ml Optiprep混合，然后取该混合液5ml与小鼠血液混合。
2）        在顶上铺少量生理盐水（0.5ml），它可以防止单核细胞在空气/介质分界面形成区带，也避免细胞在血浆/离心管壁交汇处堆积。
3）        在20℃、1000~1200g离心30分钟
4）        用吸管收集弯月面的细胞，除去距沉淀2cm以上的所有上清液。
说明：大多数细胞在血浆/生理盐水分界面处的区带里，但10%~15%在沉淀上面的血浆里。
 
文章链接：中国化工仪器网