冷冻离心机单核细胞分离技术

单核细胞分离技术
　　
　　(一)铁粉吸附法
　　
　　1．材料及试剂
　　
　　(1)铁粉或羰基铁粉(Atomergicchemetals)99％的纯度，颗粒小于60µm(GoodfellowMetals)。
　　
　　(2)强磁铁(马蹄形)。
　　
　　(3)一块小棒状磁铁(约1cm长)。
　　
　　(4)毛细吸管等。
　　
　　2．操作方法
　　
　　(1)称取一定量的铁粉，一般为10g，用100ml生理盐水洗涤4次，去除任何可溶性有毒物质。在倒去盐水时，用强磁铁吸住铁粉。
　　
　　(2)用50ml生理盐水混悬铁粉。摇匀后，分装于10个瓶中，包扎瓶口，121℃灭菌20min，拿出后立即轻轻摇匀，防止铁粉结块，储藏备用。
　　
　　(3)临用前，倒去瓶中的生理盐水，加入适量的单个核细胞悬液(3ml～5ml，细胞总数为8×107个／瓶)。37℃温育45min，中间不时晃动，使铁粉悬浮起来。
　　
　　(4)加入一块小磁铁棒于瓶中，让其吸住铁粉以及附着在铁粉上的细胞。
　　
　　(5)倒出悬液，此悬液主要是淋巴细胞，离心，收集。
　　
　　(6)在铁粉瓶内倒入一定量的Hank’s液，用力振摇后，以强磁铁吸附，几分钟后，倒出液体。
　　
　　(7)2000r/min离心液体，管底即为单核细胞。
　　
　　(二)玻璃板吸附法
　　
　　将分离的单个核细胞倾于无菌洁净的玻璃平皿内，置37℃30min～40min，用毛细吸管轻轻吸取悬液，即为淋巴细胞。用适量的Hank’s液冲洗平皿，收获即为单核细胞悬液