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叶绿体分离实验

时间:2015年12月22日 信息来源:湘智离心机 字体: 打印此页

设备: 离心机,50ml转头 PP 离心管,超速离心机,转头,40ml PA管。 溶液配置: A液:0.35M Sorbitol,(山梨醇),50mM Tris桯CL (PH8.0) 5mM EDTA-Na2 B液:0.35M Sorbitol,50mM Tris桯cl (PH8.0) 25mM EDTA桸a2 C液:30%(w/w)蔗糖,50mM Tris-Hcl(PH8.0) 25mM EDTA桸a2 D液:52%(w/w)蔗糖,50mM Tris-Hcl (PH8.0) 25mM EDTA桸a2   分离步骤: 1.菠菜液40g+A液200ml,制成匀浆,过滤 2.离心机2500RPM?5分,4℃,50mlPP管,得到约10克沉淀。 3.沉淀用6.5ml B液稀释后得到9.5-10ml原液 4. 日立超离R28S转头(6?0ml),40mlPA管中底部加18ml D液,中层7ml C液,上部加9.5-10ml 原液。   离心:25,000rpm,60分,4℃,加速7减速8 5.离心后,叶绿体分布在离心管中部形成叶绿体深色条带(宽13-15mm) 6.检视:可用光学显微镜(?50)可观察到绿叶体颗粒。



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