血细胞的离心分离

在现代临床医学研究中，常常需要将全血中单核白细胞（淋巴细胞、大单核细胞）与红细胞和多形核白细胞分离。在临床治疗应用中常常需要将全血作成分分离（全血分离成血浆，血小板，白细胞，红细胞等等）

（一）血细胞的实验室纯化：
血液中存在着各种不同类型的血细胞，每种类型细胞有不同的特点和功能。医学研究常常需要较纯的单一品种的血细胞。用离心法分离和纯化是非常有效的手段，但如何使血细胞的密度梯度分离简单而且实用，很多科学家和试剂生产厂作了大量的研究和筛选。在这方面Bφyum（文献1）做了开拓性的研究，他使用挪威Nycomed pharma，A/S公司生产的梯度材料Lymphoprep 和由瑞典Pharmacia-Biosystems AB 公司提供的Ficoll Paque，用简单的低速阶梯梯度离心纯化了单核白细胞获得成功。此后（文献2），用非电离性梯度材料Na-metrigoate 和Nycodenz（可消除多糖成分）纯化血细胞效果更好。

典型的离心分离实验：
1. 人血单核细胞的纯化：
Ⅰ 加有抗凝剂的全血样品，通常加0.32％柠檬酸钠较为普遍；
Ⅱ 用等量的等渗盐液稀释全血
Ⅲ 在10－15ml离心管下部注入3ml Na-metrizoate-Ficoll分离液
Ⅳ 在分离液上部小心地铺盖6ml已经稀释的全血
Ⅴ 低速离心机，水平转头，单管容量10－15ml，600xg，20分钟，20℃，慢加速，慢减速。（不要用4－5℃，否则效果很差）
Ⅵ 离心后，单核细胞和少量血小板悬浮在血液样品和分离液的中向夹层，小心地用吸管吸出
Ⅶ 在单核细胞中加几毫升生理盐水以降低其密度
Ⅷ 用同样的离心机250xg，5分钟，20℃?#27927;?#25968;次，可以得到更纯的单核细胞沉淀
Ⅸ 制备的细胞可重悬浮在生理盐水或同源血浆中待用

2. 单核血细胞和多形核血细胞的单次离心分离法：
Ⅰ 刚抽出的新鲜人血，加抗凝剂后，取3-5ml铺在10ml离心管底部
Ⅱ 血样上部铺等量的Polymorphoprep（Nycomed Pharma A/S公司产品）
（注意：选择较细长透明塑料（PC或PET）离心管或玻璃离心管，液柱总高在6－10mm左右）
Ⅲ 离心：低速或高速冷冻离心机水平转头450g?5分钟，20℃
Ⅳ 离心后细胞分布：以10cm液柱为例，底部1.2－1.4cm为红细胞，往上3cm为分离液，再往上0.4cm为中性白细胞带（多形核白细胞），再往上0.6－0.8cm为分离液，在这层分离液和最上层血浆之间夹有一层约0.4cm液柱高的单核细胞
Ⅴ 如果离心时间过长，或温度过高，多形核白细胞（主要是中性白细胞）也会变成沉淀